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1.    分组培养胚胎滋养层细胞，探索γ-CEHC在妊娠期糖尿病模型中的表达；

2.  胎盘滋养细胞与巨噬细胞共培养，使用γ-CEHC处理细胞，结合CB2受体激动剂和抑制剂，对巨噬细胞进行检测

服务类

本次服务主要是为了探索高糖对滋养层细胞氧化应激和细胞损伤的影响；同时通过高糖干预滋养层细胞γ-CEHC水平，研究微环境影响巨噬细胞极化，这两个目的。具体实施方案如下：

第一部分：γ-CEHC在糖尿病模型中的表达特征

1.体外实验：使用高糖处理胎盘滋养层细胞，进行如下检测：

分组：常规培养基（4.5 g/L），中糖培养基（9 g/L），高糖培养基（15 g/L）

a. 流式细胞术检测细胞内氧自由基；

b. JC-2探针检测线粒体膜电位；

c. TUNEL检测细胞损伤；

d. 透射电镜观察胞内线粒体量的变化；探针法和试剂盒方法检测细胞内ATP产量变化；

2.收集对照组和GDM患者胎盘组织，进行如下检测：

a. 试剂盒方法检测组织中8-OHdG水平；

b. 透射电镜观察胎盘滋养层组织细胞中线粒体数量和形态；

c. 免疫荧光方法检测γ-CEHC表达定位；并检测CB2受体在组织中的分布情况；

第二部分：γ-CEHC对蜕膜巨噬细胞影响

1.使用高糖处理胎盘滋养层细胞，将其与巨噬细胞共培养，并使用γ-CEHC处理细胞，结合CB2受体激动剂和抑制剂，对巨噬细胞进行如下检测：

分组：

滋养层细胞：常糖组，高糖组，高糖+γ-CEHC，高糖+γ-CEHC，高糖+γ-CEHC，

巨噬细胞：M0，M0，M0，M0+CB2受体激动剂，M0+CB2受体抑制剂

a. 流式细胞术检测M1、M2极化水平；

b. ELISA检测相应的细胞因子；

c. WB检测M1和M2标记蛋白；

d. Transwell检测各组巨噬细胞迁移能力；

2.建立高糖胎盘滋养层细胞模型，使用线粒体自噬抑制剂处理细胞，对细胞进行如下检测：

滋养层细胞：常糖组，高糖组，高糖+Mdivi-1

a. 透射电镜观察胞内线粒体量的变化；探针法和试剂盒方法检测细胞内ATP产量变化；

b. ELISA试剂盒和qPCR方法检测γ-CEHC水平；

c. WB检测LC3B、Beclin 1、PARKIN、PINK1表达水平；透射电镜检测自噬小体。

实验必须保证客观性，真实性和唯一性。结束后需要提供6个月的售后期，提供原始数据和详细实验报告单。

24例

28000元